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    常見細(xì)胞培養(yǎng)試劑的配制方法分享

    發(fā)布時(shí)間: 2021-09-23  點(diǎn)擊次數(shù): 2899次

    培養(yǎng)用液是維護(hù)組織細(xì)胞生存、生長(zhǎng)及進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)各項(xiàng)操作過程中所需的基本溶液。常用的細(xì)胞培養(yǎng)試劑包括:超純水,平衡鹽溶液,消化液,PH調(diào)整液,谷氨酰胺溶液,抗生素溶液。


    常見的超純水

    1. 使用純水機(jī)純化而來;

    2. 蒸餾水和離子交換水

    3. 三蒸水


    平衡鹽溶液

    1、平衡鹽溶液主要由無機(jī)鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡(jiǎn)單的營養(yǎng)。主要用于取材時(shí)組織塊的漂洗、細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。

    2、D-Hank’s與Hank’s的一個(gè)主要區(qū)別在于前者不含有Ca2+、Mg2+,因此D-Hank’s常用于配制胰酶溶液。

    3、配制平衡鹽溶液也應(yīng)當(dāng)用三蒸水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+,應(yīng)當(dāng)首先溶解這些成分。配好的平衡鹽溶液可以過濾除菌或高溫高壓滅菌.


    幾種常見的平衡鹽溶液配方:

    品名(單位:g/L)PBSHank‘sD-Hank‘s
    NaCl88
    8
    KCl0.20.40.4
    CaCl2
    -0.14-
    MgCl26H2O---
    MgSO47H2O-0.2-
    Na2HPO4H2O1.560.060.06
    NaH2PO42H2O---
    KH2PO40.20.060.06
    NaHCO3-0.350.35
    葡萄糖
    -1-
    酚紅-0.020.02


    消化液

    (1)以配制250ml0.25%DEDTA的胰酶為例,稱取胰蛋白酶粉末0.625g置燒杯中,先用少許D-Hanks 或PBS平衡鹽溶液(pH7.2 左右)調(diào)成糊狀,然后再補(bǔ)足D-Hanks 平衡鹽溶液,并不斷攪拌振蕩直到攪拌混勻,置室溫4 小時(shí)或冰箱過夜;

    (2)次日,先用濾紙粗濾,再進(jìn)行過濾除菌,定容至250ml,分裝于鹽水瓶或三角瓶,低溫冰箱保存?zhèn)溆茫让赋S脻舛葹?.25% 或0.125%。

    胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健,除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白,影響細(xì)胞骨架,從而使細(xì)胞分離。

    胰蛋白酶液濃度越高,作用越強(qiáng),但超過一定限度會(huì)損傷細(xì)胞。

    胰蛋白酶是一種黃白色粉末,用無Ca2+、Mg2+的PBS緩沖液配制常用的胰蛋白酶液濃度是0.25% 。用濾器過濾除菌。

    胰蛋白酶液消化時(shí)間:2-10分鐘,用含血清培養(yǎng)液終止其對(duì)細(xì)胞的消化作用。


    pH調(diào)整液

    常用的有HEPES液和NaHC03溶液

     1.NaHC03溶液:NaHC03是培養(yǎng)基中必須添加的成分,一般情況下是按照說明書的要求準(zhǔn)確添加,以保證培養(yǎng)基在5%CO2的環(huán)境下pH達(dá)到設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)。

     2.HEPES液:HEPES是一種弱酸,中文名稱是羥(乙)基(派)嗪乙硫磺酸。HEPES對(duì)細(xì)胞無毒性,主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動(dòng)

    100X的Hepes配制:取23.8g的HEPES溶于90ml的雙蒸水中 ,用1N的NAHCO3調(diào)PH至7.8-8.0之間,過濾除菌,定容至100ml.


    谷氨酰胺補(bǔ)充液:

    谷氨酰胺在細(xì)胞代謝過程中起重要作用,合成培養(yǎng)基中都要添加,由于谷氨酰胺容易降解,所以都是在使用前添加。谷氨酰胺使用終濃度為0.002mol/L。

    一般配制為100倍濃縮液,配制時(shí)應(yīng)加溫至30℃,*溶解后過濾除菌,分裝至小瓶,儲(chǔ)存于-20℃。


    抗生素溶液:

    常用的是青鏈霉素,俗稱“雙抗溶液"。

    青霉素主要對(duì)革蘭陽性菌有效,鏈霉素主要對(duì)革蘭陰性菌有效。加入這兩種抗生素可預(yù)防絕大多數(shù)細(xì)菌的污染。

    青霉素使用的終濃度為100000U/L,鏈霉素使用的終濃度為0.1g/L。一般配制成100倍濃縮液,可用PBS或培養(yǎng)基配制。




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