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    細(xì)胞轉(zhuǎn)染率低,轉(zhuǎn)染試劑要全背鍋嗎?

    發(fā)布時間: 2021-09-24  點(diǎn)擊次數(shù): 1241次

    目前細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為三大類:化學(xué)法、物理法及生物學(xué)法。但是沒有一種方法是通用并且準(zhǔn)確無誤的,所以只有依據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)要求或者實(shí)驗(yàn)探索選擇理想的方法,才能獲得漂亮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)然也可以在前輩們發(fā)的文獻(xiàn)中多看看,前車之鑒可以減少很多不必要的花費(fèi)。

    細(xì)胞轉(zhuǎn)染低都是轉(zhuǎn)染試劑的問題嗎?純度不夠確實(shí)會有這樣的問題,所以選擇轉(zhuǎn)染試劑很重要,其次還需要考慮以下幾點(diǎn)影響:

    1. 其他微生物污染

    您覺得您養(yǎng)的細(xì)胞 ,不,不,不 ,可能您只知道您養(yǎng)的是細(xì)胞,你不知道的是您的細(xì)胞可能背著您養(yǎng)了一群小三,比如支原體,病毒,黑膠蟲等等,特別是支原體它可以更改細(xì)胞的特性,穿透細(xì)胞膜進(jìn)行基因改造,培養(yǎng)幾代可能看不到“它"給細(xì)胞做的整容效果,但是隨著代次的增多,細(xì)胞就慢慢體現(xiàn)出來了,“它"已經(jīng)變得不是從前的那個“它"了,所以建議在轉(zhuǎn)染之前進(jìn)行一次支原體檢測,如有支原體清除干凈再轉(zhuǎn)染。

    2.交叉污染:

    如果同時養(yǎng)了很多細(xì)胞,在操作的時候沒有規(guī)范化,然后不小心讓A細(xì)胞到B細(xì)胞家里走了個親戚,最后的結(jié)果可能就是A細(xì)胞和B細(xì)胞不離不棄,若B細(xì)胞比較強(qiáng)悍,可能會發(fā)生鳩占鵲巢的事情。所以操作的時候一定要注意,發(fā)生不明確的交叉污染,寧可錯殺一千,不要放過一個。

    3.轉(zhuǎn)染高不高,時機(jī)很重要

    轉(zhuǎn)染細(xì)胞真的沒有那么容易 ,想什么時候都可以,就像不尿急,占個廁所也拉不出來,相比非分裂的細(xì)胞—正在分裂的細(xì)胞往往會比靜止細(xì)胞更容易攝取并表達(dá)外源DNA,因此對大多數(shù)操作而言,細(xì)胞一般建議在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或者前一天種板,需要注意的是,鋪板細(xì)胞不宜過多,特別是瘋長的癌細(xì)胞,因?yàn)槿绻?xì)胞較多,甚至互相疊加,細(xì)胞自己都吃不飽,住不好,它也糟心的很,哪有時間和您玩轉(zhuǎn)染?

    4. 抗生素和血清帶偏的轉(zhuǎn)染效果

    本來想 ,能讓個細(xì)胞好好生長不容易 ,為了防治心里覺得細(xì)胞可能產(chǎn)生的各種污染 ,于是給他們加上各種抗生素預(yù)防,比如青霉素和鏈霉素,在細(xì)胞轉(zhuǎn)染的時候,若含有這兩個組分,可增加細(xì)胞的通透性,導(dǎo)致轉(zhuǎn)染過低或者細(xì)胞全死亡,所以細(xì)胞它是不會說話 ,要是會說話,肯定要罵我們了 ,好好的為啥一直給他們吃各種的藥。有些轉(zhuǎn)染技術(shù)如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在有血清存在的情況下效率會很低,因此轉(zhuǎn)染前要去除血清。

    5. 另外DNA不純,攜親戚上陣或內(nèi)毒素超標(biāo),都會引起轉(zhuǎn)染效果偏低或者細(xì)胞死亡現(xiàn)象的發(fā)生,還是回到開頭的那句話,選擇合適的試劑,多參考前輩們的意見。


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