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    科研實驗無小事——細胞的STR鑒定

    發(fā)布時間: 2021-09-29  點擊次數(shù): 1863次

    做實驗的時候才發(fā)現(xiàn)細胞的種類太多,于是我們需要查詢各種文獻看每個細胞的特征,從而設(shè)計實驗規(guī)劃與步驟,我們在緊湊的實驗種完成了實驗,提交文章的時候,才發(fā)現(xiàn),需要細胞鑒定。


    據(jù)統(tǒng)計約30%細胞系被交叉污染或錯誤辨識,因使用了交叉污染或錯誤辨識的細胞而導(dǎo)致研究結(jié)論錯誤、結(jié)果不可重復(fù)、臨床細胞治療災(zāi)難性后果……這浪費大量時間、精力和金錢。因此NIH、ATCC等機構(gòu)多次發(fā)出呼吁,要求研究者對細胞進行鑒定,最近美媒報道1/6科學(xué)家在研究使用“假"細胞,2014年12月、2015年2月Science雜志分別發(fā)表文章專題闡述細胞交叉污染和錯誤辨識的嚴重性;2015年4月Nature通知:Nature旗下所有雜志將要求作者鑒定論文中所用細胞系;2015年6月即有報道稱一科學(xué)家因用錯細胞系,撤銷Nature論文。NIH、ATCC、Nature和Science等機構(gòu)對此多次發(fā)出呼吁,要求研究者對細胞進行鑒定,STR基因分型已被作為金標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用于細胞系鑒定,越來越多雜志開始要求投稿人提供細胞STR鑒定結(jié)果。


    在2011年美國就已經(jīng)頒布了細胞STR鑒定國家標(biāo)準(zhǔn)(ANSI/ATCC ASN-0002-2011)。目前STR檢測已被廣泛應(yīng)用于親子鑒定、個體識別、細胞來源判定等方面。ATCC、DSMZ、JCRB等國際有名細胞庫已將STR基因分型列為細胞鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)。


    STR鑒定已經(jīng)成為了細胞株的“ID"能在科研界通行無阻,必須要有STR。那么動物源呢,因為建立的DNA條帶并不完善,目前只有小鼠的部分細胞可以提供STR。


    STR鑒定描述:

    利用熒光標(biāo)記擴增產(chǎn)物長度多態(tài)分析方法對細胞樣本進行9個/16個STR位點進行分型。設(shè)計PCR引物,組成2個PANEL用于擴增多態(tài)位點。位點的熒光標(biāo)記采用引物上標(biāo)記5’FAM熒光標(biāo)記。引物用在線Primer3 軟件設(shè)計。PCR產(chǎn)物稀釋后取少量與內(nèi)標(biāo)標(biāo)記混勻后直接上ABI 3130xl進行毛細管電泳,數(shù)據(jù)文件用GeneMapper4.0(Appliedbiosystems)來分析。


    STR(Short Tandem Repeat,短串聯(lián)重復(fù)序列)是一類廣泛存在于真核生物基因組中的DNA串聯(lián)重復(fù)序列,由于其核心序列重復(fù)次數(shù)存在個體差異多態(tài)性,因此STR也被稱為細胞的DNA指紋。



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