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    生化轉(zhuǎn)染的另一種選擇,磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染

    發(fā)布時(shí)間: 2021-10-11  點(diǎn)擊次數(shù): 1436次

    磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法應(yīng)用于將外源DNA轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的細(xì)胞,已有45年以上的歷史。Graham和van der Eb在磷酸鈣存在下,將病毒DNA導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的這一工作,為基因在多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)奠定基礎(chǔ)。


    因此,即使脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法是我們首先選擇,依然有很多實(shí)驗(yàn)員在使用磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。


    他的主要原理是,磷酸鈣與DNA形成不可溶的沉淀物,即磷酸鈣-DNA復(fù)合物,吸附于細(xì)胞膜表面,通過(guò)細(xì)胞的內(nèi)吞作用或吞噬作用,進(jìn)入細(xì)胞中。磷酸鈣起到促進(jìn)DNA進(jìn)入的細(xì)胞的作用。


    磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)點(diǎn):

    1、細(xì)胞毒性低

    2、可轉(zhuǎn)染大質(zhì)粒

    3、操作簡(jiǎn)單

    4、成本非常低廉。


    但具有以下缺點(diǎn):

    1、由于試劑的PH值對(duì)沉淀形成有巨大影響,對(duì)于不同核酸需要調(diào)整方案

    2、有時(shí)會(huì)表現(xiàn)出免疫原性

    3、對(duì)原代細(xì)胞無(wú)效

    4、不能在細(xì)胞培養(yǎng)基中制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物。


    在使用上有很多需要注意的地方,這可能也是在生化方法中,脂質(zhì)的優(yōu)先級(jí)別更高的理由


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