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    B 淋巴細(xì)胞膜表面免疫球蛋白的檢查

    發(fā)布時間: 2023-04-12  點擊次數(shù): 790次

    原理

    SmIg 是B 細(xì)胞的抗原識別受體,也是B 細(xì)胞特異的表面標(biāo)志,用直接免疫熒光法可檢查出SmIg。用熒光素標(biāo)記的抗Ig 抗體,在一定條件下與淋巴細(xì)胞混合,熒光素標(biāo)記的抗Ig 抗體可以與B 細(xì)胞表面的Ig 結(jié)合,在熒光顯微鏡下觀察可見B 細(xì)胞膜上出現(xiàn)熒光。此方法可用來鑒定B 淋巴細(xì)胞。

    材料與儀器

    ICR 小鼠
    異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的兔抗小鼠Ig 抗體 Hank's液
    臺式離心機 離心管 吸管 移液管

    步驟

    1. 采用頸椎脫臼法處死小鼠,解剖取出脾臟放入盛有6 ml Hank's液的平皿中,用100 目鋼網(wǎng)研磨,混勻。從中吸取1 ml細(xì)胞懸液放入一試管中,加滿Hank's液,離心1000 rpm,10 分鐘,洗滌細(xì)胞一遍。傾去上清,沉積的細(xì)胞恢復(fù)1 ml容積,即為約1x107/ml的細(xì)胞懸液。另取一支試管,吸取1x107/ml的細(xì)胞懸液0.4 ml加Hank's液3.6 ml,即為1x106/ml的細(xì)胞懸液。
    2. 取2 ml離心管兩只,各加入1x106 /ml的細(xì)胞懸液1 ml,用臺式離心機離心2000 rpm,3 分鐘,棄去上清液。一支加入熒光素標(biāo)記的兔抗鼠Ig抗體100 ul,另一支不加抗體作對照,置4 ℃冰箱30 分鐘。
    3. 取出離心管,用Hank's 液洗滌細(xì)胞兩次,以去除游離的抗體,最后一次離心后棄去上清液,留少許回流液,混勻,滴片,用熒光顯微鏡觀察。

    注意事項

    一、在滴片前要去除游離的抗體,以避免假陽性結(jié)果。



    常見問題

    實驗結(jié)果
    熒光顯微鏡觀察,落射激發(fā)光下SmIg 陽性細(xì)胞可見環(huán)狀或斑點狀熒光。用鎢絲燈光源透射光照明計數(shù)同一視野內(nèi)淋巴細(xì)胞總數(shù),共計數(shù)200~300 個淋巴細(xì)胞,算出其中SmIg 陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。


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