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    PCR 產(chǎn)物純化

    發(fā)布時(shí)間: 2023-04-21  點(diǎn)擊次數(shù): 908次

    材料與儀器

    TE 或去離子水 PCR 產(chǎn)物
    離心機(jī)和轉(zhuǎn)子 PCR 濾 件 微量離心管

    步驟

    一、材料

    1. 緩沖液和溶液

    TE(lOmmol/L Tris-HCl,lmmol/L EDTA,pH7.5) 或去離子水

    2. 核酸和寡核苷酸

    待測(cè)序的 PCR 產(chǎn)物

    3. 離心機(jī)和轉(zhuǎn)子

    帶有固定傾角轉(zhuǎn)子的小型離心機(jī),如 Eppemlorf5415C

    4. 特殊設(shè)備

    AmiconMicrocon-PCR 濾件(Millipore) 或者相當(dāng)?shù)漠a(chǎn)品,微董離心管或接收管

    二、方法

    1. 對(duì)每一個(gè)待純化的 PCR 產(chǎn)物,都在接收管中放置一個(gè)濾件,濾件的儲(chǔ)液面向上

    儲(chǔ)液池中加入 400ul 去離子水或 TE,注意加樣時(shí)不要觸及膜。加入 100ulPCR 產(chǎn)物,避免帶進(jìn)礦物油。如果 PCR 產(chǎn)物不足 100ul, 用去離子水或 TE 補(bǔ)足,蓋上蓋子。

    2. 將 1 中所得組合體用帶有固定傾角轉(zhuǎn)子的離心機(jī),l000 g 離心 15 min(例如,Eppendorf5415C 離心機(jī)上 3300r/min)。注意蓋子和管的結(jié)合部朝向轉(zhuǎn)子的中央。

    3. 移去濾件,將其放入一干凈的收集管中,有膜面朝上(如果愿意,濾件可以一直

    存到樣品分析結(jié)束)。在濾件上小心地加 20ul 去離子水或 TE,注意不要觸及膜,然后將濾件反轉(zhuǎn)過(guò)來(lái),放回到干凈的收集管中,使帶有液體的一面朝下。

    4.1000 g 離心 2 min, 收集純化的片段。


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