簡介：

免疫熒光技術(shù)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法用小玻片，先泡酸、再晾干、再 coating、再種細(xì)胞、染色、封片成像。

本文章使用新方法，我們將描述在通道載玻片內(nèi)培養(yǎng)大鼠成纖維細(xì)胞（Rat1）的單個實(shí)驗(yàn)案例。然后，我們用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽染色F-肌動蛋白細(xì)胞骨架，并用DAPI對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染。

實(shí)驗(yàn)步驟：

培養(yǎng)，固定，染色，成像

培養(yǎng)：

1.在無菌條件下打開ibidi μ-Slide并將其放在μ-Slide架（80003）上。將Rat1細(xì)胞懸浮液加入通道中。

2.用提供的蓋子輕輕地蓋住儲液器。可以部分關(guān)閉它們。

3.將架子放入培養(yǎng)箱（37°C; 5％CO2）中，讓細(xì)胞附著（60分鐘）。然后用無細(xì)胞培養(yǎng)基填充兩個儲庫。

4.培養(yǎng)過夜。

固定細(xì)胞：

1.通過使用細(xì)胞培養(yǎng)抽吸裝置或移液管從儲庫中吸出整個培養(yǎng)基。用Dulbecco's PBS洗滌細(xì)胞，緩慢地將液體施加到一個空的儲液器中，并從對面的儲液器中吸出。

2.通過在PBS中使用3.7％多聚甲醛以相同的方法固定細(xì)胞。從通道的另一側(cè)移除儲液器的液體并等待10分鐘。

洗滌封閉：

1.用PBS洗滌細(xì)胞。

2.在PBS中使用0.1％Triton®X-100溶液通透3-5分鐘。

3.在PBS溶液中施加μl的1％BSA 溶液封閉20分鐘。

4.用PBS洗滌細(xì)胞

染色鏡檢

1.從通道中清除所有液體。從通道中吸出液體后，不要讓通道干燥。

2.用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽（1Unit+500μl PBS+ 1％BSA，InvitrogenCorp.）在室溫下培養(yǎng)20分鐘。

3.用PBS洗滌細(xì)胞并清空通道。

4.施用DAPI（0.1μg/ ml，Sigma-Aldrich）3-5分鐘。

5.用PBS洗滌細(xì)胞并除去所有液體。用滴管瓶注入 Ibidi封片油。用提供的蓋子蓋住儲液器。μ-Slide可以存儲大約4周。

6.在熒光顯微鏡下選擇適當(dāng)?shù)臑V鏡，也可以使用浸油觀察細(xì)胞。

優(yōu)點(diǎn)：

1.高分辨率成像

  ibidi載玻片非常適合寬場熒光、共焦成像、FRAP、FRET、FLIM和相差成像。

2.操作快速、簡單

  一體式腔室簡化了您的免疫熒光實(shí)驗(yàn)流程。

3.經(jīng)濟(jì)高效的實(shí)驗(yàn)

  僅需少量細(xì)胞和少量試劑。

  深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。