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    Caco2 細胞培養(yǎng)經(jīng)驗分享

    發(fā)布時間: 2024-05-09  點擊次數(shù): 356次

    背景介紹

    Caco2細胞是常見的結(jié)腸腺癌細胞,正常情況下,Caco2細胞在培養(yǎng)的過程中貼壁生長,其形狀多為多邊形或梭形,增殖速度較快,其鏡下形態(tài)如下圖所示,密度已大于90%。可以進行傳代。


    培養(yǎng)方法:

    1.培養(yǎng)基配置:DMEM高糖培養(yǎng)基 + 10%胎牛血清 + 1%青霉素鏈霉素雙抗 + 1%谷氨酰胺。


    2.其余需要準備的試劑耗材包括:無菌PBS、腺酶、無菌槍頭、細胞培養(yǎng)皿、15ml離心管、離心機、生物安全柜、水浴鍋、75%酒精。


    3.培養(yǎng)條件:37°C、5%CO2的細胞培養(yǎng)箱;


    4.細胞復蘇:提前將水浴鍋溫度調(diào)至37°C,從液氮罐中拿出細胞,迅速放在37°C水浴鍋中輕輕晃動,使細胞快速融化,融化后用移液器輕輕混勻,將其轉(zhuǎn)移到15ml離心管內(nèi),加入1-2ml培養(yǎng)基,室溫800rpm離心5min,去上清后加入1ml培養(yǎng)基重懸10次左右,將其全部加入6cm細胞培養(yǎng)皿內(nèi)(提前加入4-6ml培養(yǎng)基),十字混勻后放入細胞培養(yǎng)箱中,24h觀察細胞密度進行后續(xù)操作。


    5.細胞傳代:當細胞密度≥90%時,進行細胞傳代,吸掉原有培養(yǎng)基,沿培養(yǎng)皿邊緣加入1ml PBS清洗,吸掉PBS后加入750μl含EDTA的胰酶消化,消化時間2min左右,消化完成后加入1.5ml培養(yǎng)基中止消化,用移液槍吹打,保證細胞全部被吹下,將混合液全部轉(zhuǎn)移到離心管中,室溫800rpm離心5min,去上清后加入1ml培養(yǎng)基充分重懸,取333μl加入有4ml培養(yǎng)基的6cm細胞培養(yǎng)皿中,十字混勻后放入細胞培養(yǎng)箱內(nèi),1-3天后根據(jù)細胞密度換液或傳代。


    6.細胞凍存前述收集細胞沉淀,加入1ml凍存液(培養(yǎng)基:FBS:DMSO=7:2:1)充分重懸,將混合液移入凍存管內(nèi),標記好基本信息,將凍存管入凍存盒后放入-80℃冰箱,24h后可將凍存管放入-80℃冰箱細胞盒內(nèi)。


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