最新毛片婷婷99精品视频,久久伊人色AV天堂九九小黄鸭,亚洲色精品AⅤ一区区三区,刺激的乱亲小说43部分阅读

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 關(guān)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗,這幾點必須要清楚

    關(guān)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗,這幾點必須要清楚

    發(fā)布時間: 2021-11-25  點擊次數(shù): 2089次

    細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如 DNA RNA 等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。可分為瞬時轉(zhuǎn)染,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

        瞬時轉(zhuǎn)染是指外源 DNA/RNA 不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細(xì)胞可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析。一般來說,超螺旋質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染效率較高,在轉(zhuǎn)染后 24-72 h 內(nèi)分析結(jié)果,常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

        穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源 DNA 既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體存在。盡管線性 DNA 比超螺旋 DNA 轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源 DNA 整合到染色體中概率很小,通常需要一些選擇性標(biāo)記反復(fù)篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。


    主要有下面幾種方法:

    化學(xué)法:磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質(zhì)體法;物理法:電穿孔法、顯微注射法、biolistic 顆粒傳遞法;病毒介導(dǎo)法:逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒

    A. 陽離子脂質(zhì)體法:

        帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。過程如下圖:

    圖片

       特點:

        簡單通用,適用性廣,轉(zhuǎn)染效率高,重復(fù)性好,但轉(zhuǎn)染時需除血清,轉(zhuǎn)染效率隨細(xì)胞類型變化大。由于脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細(xì)胞的接觸機(jī)會遠(yuǎn)大于懸浮細(xì)胞,所以貼壁比懸浮轉(zhuǎn)染效率要高。懸浮細(xì)胞建議使用電穿孔法。

    B. 電穿孔法:

        利用高壓電脈沖對細(xì)胞膜的干擾,使其形成利于核酸進(jìn)入的微孔。

    C. 逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA):

        通過病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面的受體相互作用進(jìn)入宿主細(xì)胞,之后反轉(zhuǎn)錄酶啟動合成 DNA 并隨機(jī)整合到宿主基因組中。

        特點:穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞,體內(nèi)細(xì)胞等,但攜帶基因不能太大。

    D. 腺病毒(雙鏈 DNA):

        先和細(xì)胞表面的受體結(jié)合,繼而在αV 整合素介導(dǎo)下被細(xì)胞內(nèi)吞。

        特點:可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。

    圖片


        影響轉(zhuǎn)染的因素:

        血清 血清影響復(fù)合物的形成,降低轉(zhuǎn)染效率

        陽離子脂質(zhì)體和 DNA 的最佳量在使用血清時會有所不同,因此想在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清時要進(jìn)行條件優(yōu)化。大部分細(xì)胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個小時內(nèi)保持健康,對于對血清缺乏比較敏感的細(xì)胞,可以使用 OPTI-MEM I 培養(yǎng)基。對于對血清缺乏比較敏感的貼壁細(xì)胞,建議使用 LIPOFECTAMINE 2000。

        抗生素

        比如青霉素和鏈霉素,是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些抗生素一般對于真核細(xì)胞無毒,但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性,使抗生素可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性,導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。

        細(xì)胞代數(shù)

        轉(zhuǎn)染前細(xì)胞最好經(jīng)過 1-2 次傳代保證細(xì)胞生長旺盛容易轉(zhuǎn)染,注意貼壁細(xì)胞一旦長滿就不好轉(zhuǎn)染。

        細(xì)胞鋪板密度

        一般轉(zhuǎn)染時,貼壁細(xì)胞密度為 70%-90%,懸浮細(xì)胞密度為 2*10^6--4*10^6 細(xì)胞/ml 時效果較好。確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。

        DNA 質(zhì)量

        DNA 質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)基于電荷吸引原理,如果 DNA 不純,如帶少量的鹽離子,蛋白,代謝物污染都會顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成和轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。

    感謝您的關(guān)注祝您科研順利!


產(chǎn)品中心 Products
国产欧美熟妇另类久久久| 国内露脸少妇精品视频| 国产露脸无码A区久久| 40熟妇疯狂做受XXXX高潮| 精品无码黑人又粗又大又长| 国精品无码一区二区三区在线蜜桃| 国产午夜片无码区在线播放| 成品网站W灬源码三叶草| 最新毛片婷婷99精品视频| 青楼SAO货养成日记H| 成人性生交A片免费看网站| 亚洲精品99久久久久中文字幕| 插不进去怎么办| 一体一道久久88色合综合网| 无码粉嫩小泬无套在线观看A片| 日本变态残虐特级A片受难| 欧美性白人极品1819HD| 车子一晃一晃的就进去D乚| 乱码丰满人妻一二三区麻豆| 新婚之夜玩弄人妻系列| 日本无码欧美激情视频二区| 99热最新成人国产精品| 色噜噜狠狠色综合成人网| АⅤ资源天堂资源库在线| 国产仑乱无码内谢| 丰满少妇被猛男猛烈进入久久| 精品国内自产拍在线观看视频| 久久精品卫校国产小美女| 极品美女扒开粉嫩小泬AV视频| 3D成人H动漫网站入口| 性色做爰片在线观看WW| 日本无码蜜桃波多野结衣| 三上悠亚上司の在线播放| 成人性生交大片免费看中国| 人妻丰满熟AV无码区HD| 免费无码又色又爽的视频软件| H高潮嗯啊娇喘抽搐A片视频动漫| 波多野结衣AV无码| 人人妻人人澡人人爽欧美精品| 久久爽人人妻人人爽人人爽| 久久亚洲色一区二区三区|