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    裸鼠皮下成瘤實驗

    發(fā)布時間: 2024-05-24  點擊次數: 376次

    裸鼠皮下成瘤實驗用于研究腫瘤的形成、發(fā)展以及針對腫瘤的治療方法。裸鼠是一種缺乏免疫系統的小鼠品種,因此能夠更容易地接受移植的異種組織,比如人類腫瘤細胞。在這種實驗中,通常會將人類腫瘤細胞注射到裸鼠的皮下組織中,形成腫瘤。然后觀察腫瘤的生長情況、病理學特征以及對治療方法的反應。


    此實驗通常用于評估潛在的抗腫瘤藥物、免疫治療方法或其他治療策略的有效性。通過在裸鼠模型中進行實驗,可以更好地理解腫瘤的生物學特性,并為臨床治療提供重要的參考依據。


    實驗步驟

    1.準備工作:準備對數期生長的、細胞密度達80-90%左右的腫瘤細胞。


    2.細胞收集:棄掉舊培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞1-2次(去除細胞中的血清),使用胰酶消化細胞,制備成細胞懸液,離心,去上清,接著用PBS或者無血清培養(yǎng)基重懸細胞并進行細胞計數,計算所需的終濃度。通常皮下瘤接種時,使用的細胞量為每支1-5×106個細胞,接種體積為0.1毫升,因此細胞懸液的濃度約為1-5×107個細胞/ml。


    3.裸鼠接種:用左手固定裸鼠后,在其左側腋窩處進行皮下注射。注射時,將針頭深入皮下約1厘米,注射體積為100微升在接種過程中,應將細胞懸液放置在冰上,以減緩細胞凋亡。


    4.接種后處理:接種完成后將裸鼠放回其籠中繼續(xù)進行飼養(yǎng),大約1周后可以觀察到腫瘤的形成。根據實驗設計,在腫瘤體積未超過1000mm3之前,需要對裸鼠進行無痛苦死亡,并取出腫瘤進行后續(xù)處理,如取瘤子拍照或活體成像。


    如圖為裸鼠成瘤實驗結果示例(對照組與處理組):裸鼠皮下成瘤實驗


    注意事項

    1.細胞在指數生長階段收集非常重要,因為細胞狀態(tài)對細胞系移植后的活力有著極大的影響。如果發(fā)現細胞系在異種移植形成的腫瘤活力較差,可以考慮使用Matrigel作為注射混合物,為植入提供豐富的基質環(huán)境。


    2、在接種時,針頭應深入皮下約1厘米,以減少注射后細胞懸液從針眼溢出的可能性。注射時,針頭應向前方穿行,且在注射前輕微移動針頭,以確保針頭處于皮下。如果針頭能夠移動,則表明它在皮下位置,否則可能在皮內或肌肉內。


    3、注射前,一定要排去針管內的空氣。


    4、每天監(jiān)測裸鼠的存活和腫瘤生長是非常重要的,通常需要測量腫瘤的最大(L)和最小(W)長度。一般來說,大約一周左右就可以觀察到米粒大小的腫瘤。


    5、細胞消化后應立即移植到裸鼠皮下,最好在30分鐘內完成。在過程中,將細胞懸液置于冰上以減緩細胞代謝。


    6、在接種前,使用槍將細胞懸液充分吹散,以確保細胞均勻分散,防止細胞聚集并降低其存活率。


    7、要注意倫理問題,為避免腫瘤過度生長,一般不建議超過1000mm3


    8、取下瘤子后,將一部分凍存于液氮中,以備將來提取蛋白質和RNA使用;另一部分則用福爾馬林固定,用于免疫組化,免疫熒光等實驗。


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