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    穩(wěn)定載體時(shí),為什么載體上通常有兩個(gè)抗性基因?

    發(fā)布時(shí)間: 2024-05-28  點(diǎn)擊次數(shù): 774次

    構(gòu)建的載體上有兩個(gè)抗性基因,但一般只有一個(gè)抗性用來篩細(xì)胞。兩個(gè)抗性基因的本質(zhì)區(qū)別是什么呢?


    我們來看看這個(gè)例子,現(xiàn)在這個(gè)是pcDNA3.1質(zhì)粒的圖譜,載體上有兩個(gè)抗性基因,Amp(氨芐青霉素)和Neo(新霉素)。


    氨芐青霉素是在bla啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下表達(dá),bla是原核表達(dá)啟動(dòng)子,在大腸桿菌可以表達(dá),因此,轉(zhuǎn)化后的質(zhì)粒用Amp可以篩選出來。


    而新霉素是在SV40啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下表達(dá),SV40是真核表達(dá)啟動(dòng)子,轉(zhuǎn)入真核細(xì)胞后表達(dá),所以只有轉(zhuǎn)進(jìn)了載體的細(xì)胞才能被篩選出來。


    所以,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時(shí),載體上的兩個(gè)抗性基因,一個(gè)用于構(gòu)建克隆時(shí)篩選細(xì)菌,另一個(gè)用來對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選。


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